Folikül Büyüklüğü ve Folikül Uyarıcı Hormon Konsantrasyonunun Sığır Oositlerinin İn Vitro Nükleer Olgunlaşması Üzerine Etkisi

Abstract

Bu çalışma folikül büyüklüğü ve folikül uyarıcı hormon (FSH) konsantrasyonunun sığır oositlerinin in vitro nükleer olgunlaşması üzerine etkisini araştırmak amacıyla yapılmıştır. Sığır ovaryumundaki (87 adet) foliküller küçük (<3 mm, 128 adet), orta (3–8 mm, 168 adet) ve büyük (9–12 mm, 148 adet) olmak üzere 3 sınıfa ayrılmıştır. Farklı büyüklüklerdeki foliküllerden aspire edilen oositler, %10 FCS ve farklı konsantrasyonlarda FSH (0,5; 1,0 ve 10,0 ?g/ml) içeren doku kültür medyumunda (TCM–199) 22 saat süreyle 38,5°C’de, %5 CO2 ve yaklaşık %95 oranında nem içeren ortamda in vitro olgunlaştırılmaya alınmışlardır. Kültür işlemi sonunda oositlerin nükleer olgunlaşmaları (MII; Metafaz II safhasına ulaşanlar) bisbenzimide (Hoechst 33258) DNA boyası ile floresan mikroskop altında belirlenmiştir. Mevcut çalışmada folikül çapının sığır oositlerinin in vitro nükleer olgunlaşması üzerine etkisinin küçük foliküllerden elde edilen oositlerde MII safhasına ulaşmış oositlerin oranı, orta ve büyük foliküllerden elde edilenlerinkinden önemli oranda daha düşük olduğu tespit edilmiştir. İn vitro olgunlaştırma medyumuna 10,0 ?g/ml FSH eklenmesinin oositlerin nükleer olgunlaşmadaki başarı oranını 0,5 ve 1,0 ?g/ml’ye göre arttırdığı saptanmıştır. Ayrıca yüksek FSH konsantrasyonunun nükleer olgunlaşmadaki iyileştirici etkisi, küçük foliküllerden elde edilen oositlerde daha fazla gözlemlenmiştir. Mevcut çalışmanın sonuçları 3–8 mm çapındaki foliküllerden elde edilen oositlerin daha başarılı bir olgunlaşma sergiledikleri, buna karşın küçük foliküllerden elde edilen oositlerin yüksek FSH konsantrasyonunda oransal olarak daha yüksek olgunlaşma başarısı sergileri saptanmıştır.

The aim of the study was to investigate the effect of follicle size and follicle stimulating hormone (FSH) concentration on nuclear maturation of bovine oocytes in vitro. Follicles on bovine ovary were classified into 3 groups according to the diameter; small (<3 mm), medium (3–8 mm) and large (9–12 mm). Oocytes were aspirated from follicles with different size and matured in tissue culture medium (TCM–199) supplemented with 10% FCS and various concentrations of FSH (0.5, 1.0 or 10 and µg/ml) for 22 hours filled with approximately 95% humidified and 5% CO2 in air at 38.5 ºC. At the end of culture period, nuclear maturation (at metaphase II; MII) of oocytes were determined by Bisbenzimide (Hoechst 33258) DNA staining under fluorescent microscope. In the present study, effect of follicle size on nuclear maturation of bovine oocytes were determined and the percentage of oocytes reached to M II stage was significantly lower in oocytes obtained small follicle than those of medium and large follicles. Supplementation of 10.0 µg/ml FSH into maturation media increased percentage of nuclear maturation compare to 0.5 and 1.0 µg/ml. Additionally, improving effect of high FSH concentration on nuclear maturation were more observed in oocytes obtained small follicles. The results of present study showed that oocytes from follicles with 3–8 mm diameters exhibited a more successful maturation, but oocytes obtained small follicles exhibited more maturation as a ratio under high FSH concentration.